迈尔斯·莫拉莱斯 演员:
来自漫威终极宇宙的蜘蛛侠。他的能力与彼得·帕克类似。他被一只放射性蜘蛛咬伤,并因此获得了超能力。偶然和其他宇宙的蜘蛛侠相遇,和他们共同对抗最强反派。他拜从另一个宇宙中穿越过来的彼得·帕克为师,逐渐成长为新一代的超级英雄。
彼得·帕克(棕发) 演员:
来自漫威616宇宙的蜘蛛侠。因被放射性感染的蜘蛛咬伤后获得类似蜘蛛的超能力,从此成为纽约城赫赫有名的超级英雄,但是在那个宇宙与玛丽·简分手,因此自甘堕落,成了中年大叔。直到他帮助训练迈尔斯·莫拉莱斯正视自己,勇于承担肩上的责任,在这期间也慢慢地找回自我。
格温·史黛西 演员:
来自漫威65宇宙的蜘蛛侠。她非常聪明、反应极快,能够以宛如舞者般优雅的身姿穿梭往来,有着芭蕾舞的经验。她的宇宙中,男友彼得·帕克因注射变异血清成为蜥蜴博士战死,伤痛欲绝的格温主动成为蜘蛛女侠,伸张正义。
暗影蜘蛛侠 演员:
来自漫威暗影宇宙的蜘蛛侠,生活在30年代经济大萧条时期。养育他的伯伯因领导工人罢工被杀后,他便穿上纯黑色战衣,在黑夜中打击罪犯。他出现的地方都失去了颜色,什么也不例外。他是个硬汉,但也是蜘蛛侠中最狡猾的。
潘妮·帕克 演员:
来自漫威14512宇宙的蜘蛛侠。她是一位来自未来的日美混血儿,也是日系的二次元萝莉,拥有一个机器人助手。她继承了父亲留下的名为“SP//dr”的蜘蛛机甲,在本和梅姨两位科学家的帮助下与机甲进行同步,成为另一个纽约的守护神。
蜘“猪”侠 演员:
来自漫威8311动物宇宙的蜘蛛侠,本名彼得·波尔克。他是个记者,总是拿着一台相机四处奔走。平时慵懒,战斗起来却绝不手软,小小的身躯蕴含着巨大的力量。
金并 演员:
超级反派。他认为是彼得·帕克害死了自己的家人,因此想要除掉蜘蛛侠,为此还建立起一台高度隐秘的超级对撞机,这台对撞机开启了通往其他宇宙的时空通道,目的想要复活自己的家人,结果导致来自其他宇宙、不同版本的蜘蛛侠也来到了迈尔斯所在的世界。
绿魔 演员:
本名诺曼·奥斯本,是蜘蛛侠的头号宿敌。他是奥氏集团的董事长,在注射了自己公司研发的“人体强化药剂”之后,获得了远超常人的各项体能。
蝎子 演员:
本名麦克唐纳·加根。他原本是一名私家侦探,他的下半身和左手臂都是蝎型装甲,蝎尾还装上了震荡弹、催泪弹甚至酸等各种攻击技能。